Bolsa de PD em Farmacologia

Post-doctoral Fellowship in Pharmacology

• Resumo Summary

  O laboratório de desordens urogenitais do Departamento de Farmacologia, Unicamp, oferece uma vaga de pós-doutorado para participar no Projeto Temático com apoio da FAPESP intitulado "Modulação da guanilato ciclase solúvel e dos níveis intracelulares de nucleotídeos cíclicos em órgãos do trato urinário inferior e próstata" (coordenação: Prof. Dr. Edson Antunes).

  O suprimento de sangue para a bexiga é derivado, principalmente, das artérias vesicais superiores e inferiores, esta última ligada à artéria ilíaca. Em modelos animais de obstrução parcial das artérias ilíacas e em animais velhos, observa-se insuficiência arterial pélvica e detrusor hiperativo. A cronicidade da isquemia pode progredir para um detrusor hipoativo e alterações morfológicas. Fisiologicamente, as espécies reativas de oxigênio (ERO) regulam diversas funções como proliferação celular e diferenciação celular, tônus vascular, resposta inata e inflamação. Entretanto, em situações onde a produção de ERO supera à dos mecanismos antioxidantes, doenças vasculares e não-vasculares são instaladas, incluindo as do trato urogenital. A baixa biodisponibilidade do NO e/ou oxidação da GCs induzida pela EROs contribui para a disfunção endotelial das artérias ilíacas bem como para alterações na reatividade das musculaturas lisas da bexiga, uretra e próstata, levando assim às desordens do trato urogenital.

  As principais enzimas responsáveis pela produção de ERO são a sintase de óxido nítrico desacoplada, a monoamino oxidase, a xantina oxidase e a NADPH oxidase (NOX). Em relação à NOX, existem 7 subtipos e é a única família de enzimas com a única função de produzir ERO. Até o momento, três isoformas de NOX (NOX 1, 2 e 4) vêm sendo bem estudadas em modelos animais e amostras de humanos e relacionadas às alterações vasculares e não-vasculares induzidas pelas EROs. Nossos estudos preliminares mostraram aumento de ERO na bexiga, uretra e próstata de ratos de meia-idade e camundongos obesos. O tratamento crônico com o ativador da GCs (BAY 60-2770) reestabeleceu os níveis de ERO e da GCs-GMPc para os níveis dos animas controle.

  Portanto, neste projeto, o candidato selecionado irá avaliar por meio de cultura de células, reatividade da musculatura lisa, ensaios in vivo e técnicas moleculares:

  i) qual(is) isolforma(s) de NOX seria(m) responsáveis pela produção de ERO no trato urinário inferior e na musculatura lisa prostática em ratos de meia-idade e camundongos velhos;
  ii) determinar se o bloqueio da ERO pela inibição farmacológica com o inibidor mais seletivo NOX1/4, GKT13783 e/ou silenciamento gênico das isoformas NOX1, NOX2 e NOX4 reestabeleceria a via GCS-GMPc e o estado hiperativo da bexiga, uretra e próstata de ratos de meia-idade e camundongos velhos, e;
  iii) realizar tratamento crônico com o inibidor mais seletivo NOX 1/4 em camundongos obesos e ratos de meia-idade e avaliar as respostas in vitro e in vivo. 

  REQUISITOS DO CANDIDATO (A)

  Obrigatórios:

  - Doutorado (adquirido nos últimos 5 anos) na área de Farmacologia, Bioquímica, Fisiologia, Biologia Molecular ou similar;
  - Domínio da língua inglesa;
  - Experiência em manipulação de rato e camundongo;
  - Experiência em manipulação de tecidos do trato urinário inferior de roedores isolamento de bexiga, próstata e uretra de rato e camundongo;
  - Experiência com modelos animais de disfunção do trato urinário inferior como obesidade (dieta hiperlipídica) e cistite induzida pela ciclofosfamida;
  - Experiência em experimentos funcionais in vivo (cistometria) e in vitro (banho para órgão isolado), Western blot e q-RT-PCR;
  - Experiência em técnicas de cultura de células para avaliar a produção de espécies reativas de oxigênio;
  - Experiência em técnicas para quantificar os segundos mensageiros AMPc e GMPc. 

  Desejáveis: 

  - Experiência em silenciamento gênico.

  O pós-doutorado tem previsão de 24 meses (podendo ocorrer prorrogação por até mais 2 anos). 

  Os candidatos interessados devem anexar os documentos abaixo: 

  a) Curriculum vitae (em arquivo, não link);
  b) Duas cartas de recomendação com informações de contato (e-mail, telefone). 

  The laboratory of urogenital disorders from the Department of Pharmacology, University of Campinas offers a post-doctoral position for participation in a Thematic Research Projetc supported by the São Paulo Research Foundation (FAPESP) entitled “Modulation of soluble guanylate cyclase and intracellular levels of cyclic nucleotides in the lower urinary tract organs and prostate” (Coordinator: Prof. Dr. Edson Antunes). 

  The vascular supply to the bladder is derived mainly from superior and inferior vesical arteries, the latter connected to the internal iliac artery. In animal models of partial obstruction of the iliac arteries and of aging, pelvic arterial insufficiency and detrusor overactivity are observed. The chronicity of the isquemia may progress to bladder underactivity and morphological changes. Reactive-oxygen species (ROS) under optimal production regulate important physiological functions as cell proliferation and differentiation, vascular tone, innate imune response and inflammation. However, in situations where the production of ROS exceeds the cellular antioxidant mechanisms, several vascular and non-vascular-related diseases are installed, including those of the urogenital tract. The lower NO bioavailability and/or sGC oxidation induced by ROS contribute to the development of endotelial dysfunction of iliac arteries and to the overactive state of the bladder, urethra and prostate smooth muscles leading to urogenital tract disorders.

  The main enzymes responsible for ROS generation are uncoupled NOS, monoamino oxidase, xanthine oxidase and NADPH oxidase (NOX). With respect to the latter enzyme, NOX family comprises seven members, and is the only known enzyme with the sole function to produce ROS. Three isoforms of NOX (NOX 1, 2 and 4) are the best studied in animal models and human samples and related to ROS-induced vascular and non-vascular alterations. Our previous studies have shown increased levels of ROS in bladder, urethra and prostate from middle-aged rats or obese mice. Long-term treatment with the sGC activator BAY 60-2770 not only restored ROS levels but also rescued the sGC-cGMP levels to that of the control animals.

  In this project the candidate will evaluate by means of cell culture, smooth muscle reactivity, in vivo assay and molecular techniques the following:

  i) to determine which NOX isoform(s) is(are) responsible for ROS production in the lower urinary tract and prostate smooth muscle of middle-aged rats and obese mice;
  ii) to determine if blockade of ROS production by pharmacological NOX inhibition with GKT13783 and/or silencing genes of NOX 1, NOX2 or NOX4 genes affect the sGC-cGMP pathway and the overactive state would be rescued in bladder, urethra and prostate from middle-aged and obese mice and;
  iii) to carry out long-term treament with GKT13783 in obese mice and middle-aged rats and assess in vitro and in vivo assays.

  Those interested should have a doctoral degree in Pharmacology, Biochemistry, Physiology and Molecular Biology and prove their scientific experience in the proposed subject and with the following:

  a) rats and mice manipulation;
  b) isolation of tissues from the urogenital tract (prostate, bladder and urethra;
  c) experience with animal models of urogenital tract disorders;
  d) experience with in vivo (cystometry) and in vitro (organ bath) assays, Western blotting, qRT-PCR and cell culture;
  e) experience with gene silencing. 

  Interested parties should send CV and two recommendation letters. 

  This opportunity is open to candidates of any nationalities. The selected candidate will receive a FAPESP’s Post-Doctoral fellowship in the amount of R$ 7,174.80 monthly and a research contingency fund (equivalent to 15% of the annual value of the fellowship), which should be spent in items directly related to the research activity.